本发明适用于生物工程技术领域，提供了一种从D‑乳酸废液中提取D‑乳酸的方法，包括：将经过D‑乳酸耐受驯化的长双歧杆菌和蜡样芽胞杆菌进行混合培养得到发酵种子液；向有D‑乳酸废液的发酵罐中接入发酵种子液，接种量为10~15%，在45~52℃温度条件下进行厌氧发酵，控制厌氧发酵期间发酵液pH值至6.5~6.8，当发酵液中的残糖含量下降至0.3~0.4g/dL后停止发酵；将待分离发酵液进行分离除杂处理。经过乳酸耐受力驯化的长双歧杆菌和蜡样芽孢杆菌可在高浓度的乳酸废液中存活，D‑乳酸废液不必稀释即可发酵培养，减少后续提取的浓缩成本，且经过发酵消耗D‑乳酸废液中的残糖后，利于提高D‑乳酸的提取效率和纯度。

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