本发明提供了一种L‑异亮氨酸的分离纯化方法，属于生物工程领域。该方法包括以下步骤：(1)发酵液除杂：于L‑异亮氨酸发酵液中加入离子去除剂，加热后离心处理，得到上清液；(2)初步纯化：将步骤(1)所得上清液通过超滤膜进行超滤处理，得到滤清液；(3)高度纯化：将步骤(2)所得滤清液酸化处理后，加入001×7型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂动态吸附后，用洗脱剂洗脱，得到洗脱液；(4)结晶：调节步骤(3)所得洗脱液的pH值至7.5，加入乙醇进行结晶，真空干燥后得到L‑异亮氨酸。本发明能有效去除发酵液中的杂质，提高L‑异亮氨酸的提取率和品质，可广泛应用于L‑异亮氨酸的工业制备中。

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