本发明公开了一种用于手性拆分的改性醋酸纤维素膜、制备方法及应用，属于手性拆分的技术领域。本发明所述的醋酸纤维素膜以醋酸纤维素膜为基膜，β‑环糊精或羟丙基‑β‑环糊精为手性选择剂，柠檬酸为连接剂制备。所述的手性醋酸纤维素膜制备过程中以次磷酸钠为催化剂，所述的β‑环糊精、柠檬酸和次磷酸钠的质量比为(2～4)：(2～4)：(0.2～0.5)。以外消旋色氨酸和扁桃酸作为拆分对象，以高效液相色谱监测滤液中D‑对映体与L‑对映体的浓度及两者浓度比，所制备的手性膜实现色氨酸完全拆分所需膜层数大大减少，且不仅对色氨酸的拆分效果优异，同时对扁桃酸对映体的拆分效果也较好，可以进行完全的拆分，克服了现有技术中手性膜拆分对象单一的问题。

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