本发明公开了一种用废糖蜜和地沟油双碳源发酵生产槐糖脂的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）将球拟酵母菌接种到YPD斜面培养基上制菌悬液（2）制种子液（3）将种子液接种于以废糖蜜和地沟油为底物的发酵培养基中发酵（4）乙酸乙酯提取槐糖脂。本发明实现废弃物的资源化利用，大大降低了槐糖脂的生产成本。解决了地沟油排放污染大、再次进入食用领域危害大的问题，实现了地沟油资源的合理化利用。该工艺不需要复杂的设备，而且发酵过程简单易行，有利于槐糖脂的开发、应用和推广。

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