本发明涉及科研试验技术领域，具体涉及一种测定绵羊粪便排泄物中类固醇代谢物含量的方法，采用一种自配试剂测定粪便类固醇代谢物的含量，所述的测定及分析步骤依次为：1)试剂的配制；2)微孔板包被蛋白质A；3)储存溶液的制备；4)工作液的配制；5)分析步骤；6)吸光率测定和计算。采用自配试剂测定绵羊粪便排泄物中类固醇代谢物含量的方法，主要基于实验室内自配试剂进行操作，节省费用。而且能够很准确地测定类固醇代谢物含量。本发明给出了绵羊的粪便排泄物中类固醇代谢物含量的测定方法，非组织损伤采样，避免了采血对类固醇激素含量的影响，避免了对畜体的伤害。

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